Staphylococcus hemolyticus on grampositiivne koagulaasi-negatiivne bakter, mis on haiglates väga levinud. Viimastel aastatel on kasvav mure haiglaga omandatud infektsioonide kõrge riski tõttu. Staphylococcus haemolyticus võib veelgi põhjustada nahainfektsioone, meningiiti, peritoniiti ja isegi sepsist. Kliinilise diagnoosimise viivitused võivad põhjustada tervisehäirete halvenemist, seega on Staphylococcus Haemolyticus kiire diagnoosimine täpse ravi võtmeks.
Professor Ji Tuo uurimisrühm Lianyungangi teise rahvahaigla kesklabori osakonnast avaldas artikli "Staphylococcus Haemolyticus kiire ja visuaalne tuvastamine kliinilistes proovides koos Mira-LFS-iga" ajakirjas "Analytici Chimica Acta", mille löögitegur on 6.2.
Uuringu ülevaade
Selles uuringus koostas prof Ji Tuo rühm meetodi MVAA geenil põhinevate Mira-LFS-i abil stafüülolyticus haemolyticus tuvastamiseks ja kasutas multi-ensüümi konstantse temperatuuri kiire nukleiinhappe amplifikatsioonitehnoloogia Mira ühendatud külgmise voolu testiga LFS-iga kiire patogeeni tuvastamise saavutamiseks. Katse viidi läbi 37 kraadi juures ja tulemused tuvastati 9 minuti jooksul tuvastustundlikkusega 0. 147 CFU/Reaktsioon. MIRA-LFS-i tuvastamise meetod sobib Staphylococcus haemolyticuse fikseeritud punkti tuvastamiseks kliinilistes proovides ja mõistab Staphylococcus hemolyticuse tuvastamise meetodit POCT abil, mis on väga väärtuslik haiguste kiireks diagnoosimiseks ja raviks alateelsetes piirkondades. Uurimisrühmas kasutas 95 juhusliku kliinilise proovi analüüsimiseks ja kliinilise rakendatavuse kinnitamiseks kasutatud Mira-LFS-i, QPCR-i ja traditsioonilisi bakterikultuuri meetodeid.
Uurimismeetodid
Ülal on näidatud Mira-LFS-testi skemaatiline diagramm. Selles uuringus kasutati ampfuture biotehnoloogia DNA konstantset temperatuuri kiiret amplifikatsioonikomplekti (kolloidse kulla testi riba tüüp) ja nukleiinhapete tuvastamise testiriba.
MVAA geeni praimeri pikkus oli 30-35 nukleotiidid ja amplifikatsioonitoote pikkus oli 100-350 bp ning kavandati kokku 6 paari kandidaat praimereid. MIRA analüüsiks kasutati standardsete stafülüütiliste stafülokoki tüvede GDNA -d, kandidaatide praimerid sõeluti ja amplifitseeritud tooted visualiseeriti 2% agaroosgeeli elektroforeesi abil.
(Amplifikatsioonitooted kuvatakse agaroosgeeli elektroforeesi abil)
Seejärel kavandatakse sond vastavalt ettepoole suunatud praimerijärjestusele (16 bp tagasi). Sondi 5 'ots on märgistatud FITC -ga ja 3' ots on märgistatud C3. 31- positsiooni nukleotiid sondis asendatakse THF -ga 30 aluspaari kaugusel 5 'otsast ja 15 aluspaari 3' otsast. Valitud tagurpidi praimeri 5 'ots on märgistatud biotiiniga.
(Ristdimeeri skemaatiline diagramm ja praimer-sondi kombinatsioonide järjestuse modifitseerimine)
Lisaks optimeeriti reaktsioonitingimused Mira-LF-de tuvastamiseks Staphylococcus haemolyticus. Testid viiakse läbi 37 kraadi juures 4-12 min 2 min intervalliga. Tulemused on näidatud 8 -minutilise reaktsiooniaja jooksul ja katseliin on selgelt nähtav. Lisaks viiakse test läbi 22-52 kraadi 5 -kraadise intervalliga. 37-42 kraad on Mira-LFS tuvastamiseks kõige sobivam temperatuur. Seetõttu olid Staphylococcus haemolyticus MIRA-LFS-meetodi optimaalne reaktsiooniaeg ja temperatuur vastavalt 8 minutit ja 37 kraadi. Koos asjaoluga, et lõpptulemust visualiseerivad LFS -i 1 minuti jooksul, on kogu tuvastamise aeg 9 minutit.
(Reaktsiooniaja ja temperatuuri optimeerimine)
Eksperimentaalsed tulemused
1. tundlikkuse kontrollimine
Staphylococcus Haemolytica kultuuride (1 0^6-10^0 CFU/ml) saadud genoomse DNA (GDNA) erinevad kontsentratsioonid (1 {{2 {1}}^0 cfu/ml) testiti Mira-LFS jaoks.
(Positiivne signaal erinevates kontsentratsioonides)
Üksuse tõenäosuslik regressioonanalüüs näitas, et Mira-LFS-i testiga määratud 95% LOD oli 0. 147cfu/reaktsioon.
(Avastamise arvutamise piir)
2. Spetsiifilisuse valideerimine
Mira-LFS-i tuvastamise selektiivsus määrati, analüüsides 18 ühiste patogeensete mikroorganismide ja 15 kliinilise stafülokoki haemolyticus tüvede tüvesid. Tulemused näitasid, et Mira-LFS-i test oli negatiivne kõigi 18 muu patogeense bakterite suhtes ja positiivne 15 Staphylococcus Haemolyticuse kontrollitud kliinilise proovi korral.
(Testiti vastavalt 8 standardsete patogeensete bakterite tüvesid ja 15 kliinilise hemolüütilise streptokoki tüvesid)
Mira-LFS-i testil on kõrge selektiivsus ja see sobib Staphylococcus haemolyticus sõelumiseks.
3. tegelik proovi testimine
Lianyungangi teise rahvahaiglast koguti juhuslikult 95 proovi, sealhulgas 35 nahaproovi ja pehmet kude, 16 uriiniproovi, 14 rögaproovi ja 30 vereproovi.
(95 kliinilist proovi testiti erinevate meetoditega)
Tulemused näitasid, et tuvastusmeetod oli 100% kooskõlas QPCR -meetodiga. Lisaks oli võrreldes kuldstandardiga (GB/T4789. 11-2003), mira-LFS-testi tundlikkus ja spetsiifilisus Staphylococcus Haemolytica infektsiooni tuvastamiseks vastavalt 100% ja 98,73%. Need tulemused kinnitavad veelgi meetodi tehnilist teostatavust Staphylococcus haemolyticuse tuvastamisel kliinilistes proovides.
MIRA-LFS-meetodit kasutatakse Staphylococcus hemolyticuse kiireks tuvastamiseks POCT abil, mis on tõhus, täpne, lihtne ja kulutõhus, mis on abiks kiireks diagnoosimiseks ja raviotsusteks.