Staphylococcus hemolyticus on grampositiivne koagulaasi-negatiivne bakter, mis on haiglates väga levinud. Viimastel aastatel on haiglaga omandatud infektsioonid nende suurema riski tõttu üha suuremat tähelepanu pälvinud. Staphylococcus haemolyticus võib veelgi põhjustada nahainfektsioone, meningiiti, peritoniiti ja isegi sepsist. Kliinilise diagnoosimise viivitused võivad põhjustada tervisliku seisundi halvenemist, seega on S. hemolyticus kiire diagnoosimine täpse ravi võtmeks.
Hiinas Lianyungangi teise rahvahaigla kesklabori osakonna õpetaja Ji Tuo uurimisrühm avaldas artikli "Staphylococcus Haemolyticuse kiire ja visuaalne tuvastamine kliinilistes proovides koos Mira-LFS-iga" ajakirja "Analytica Chimica Acta", mille mõju tegur on 6.2.
1. UURINGURINE ÜLEVAADE
Selles uuringus loodi Staphylococcus haemolyticuse tuvastamiseks MVAA geenil põhinev MIRA-LFS-meetod. Kiire patogeeni tuvastamiseks ühendati multi-ensüümi isotermiline kiire nukleiinhapete amplifikatsioonitehnoloogia Mira.
Katse viidi läbi 37 kraadi juures ja tulemusi oli võimalik tuvastada 9 minuti jooksul. Avastustundlikkus oli 0. 147cfu/reaktsioon.
Mira-LFS-i tuvastamise meetod sobib Staphylococcus hemolyticus fikseeritud punkti tuvastamiseks kliinilistes proovides, realiseerides POCT-meetodi Staphylococcus hemolyticus tuvastamiseks, mis on väga väärtuslik haiguse kiireks diagnoosimiseks ja raviks piirkondades, kus on alateadlikud meditsiiniteenused.
Uurimisrühm kasutas 95 juhusliku kliinilise proovi analüüsimiseks ja kliinilise rakendatavuse kinnitamiseks kasutatud Mira-LFS, QPCR ja traditsioonilised bakterikultuuri meetodid.
2. Uurimismeetodid
MIRA-LFS-i tuvastamise skemaatiline diagramm on näidatud ülal.
Uuringus kasutati AMP-future Biotechi DNA isotermilist kiiret amplifikatsioonikomplekti (kolloidse kulla testi riba tüüp) ja nukleiinhapete tuvastamise testribad.
MVAA geeni praimeri pikkus on 30-35 nukleotiidid ja võimendusprodukti pikkus on 100-350 bp. Projekteeriti kokku 6 paari kandidaatide praimereid. MIRA analüüs viidi läbi standardsete Staphylococcus hemolyticus tüvede GDNA abil, sõeluti kandidaatpraimerid ja kuvati amplifikatsioonitooted, kasutades 2% agaroosgeeli elektroforeesi.
Seejärel kujundage sond, mis põhineb ettepoole suunatud praimerijärjestusel (pikendab 16 bp tagasi). Sondi 5 'ots oli märgistatud FITC -ga ja 3' ots märgistati C3 blokeerimisega. Kasutage sondi 31 nukleotiidi asendamiseks THF -i. THF on 5 'otsast 30 aluspaari ja 3' otsast 15 aluspaari. Valitud tagurpidi praimeri 5 'ots on märgistatud biotiiniga.
Lisaks optimeeris uurimisrühm reaktsioonitingimusi Staphylococcus hemolyticuse Mira-LFS-i tuvastamiseks. Test 37 kraadi vahemikus 2 minutit 4–12 minutit. Tulemused kuvatakse 8 -minutilise reaktsiooniajaga ja katseliin on selgelt nähtav. Lisaks viiakse testid läbi 5 kraadi vahemikus 22-52 kraadi. 37-42 kraad on Mira-LFS tuvastamiseks kõige sobivam temperatuur. Seetõttu on Staphylococcus haemolyticus jaoks Mira-LFS-meetodi optimaalne reaktsiooniaeg ja temperatuur vastavalt 8 minutit ja 37 kraadi. Koos lõpptulemuse visualiseerimisega LFS -iga 1 minuti jooksul on kogu tuvastamise aeg 9 minutit.
3.Experimentaalsed tulemused
Tundlikkuse kontrollimine
MIRA-LFS test viidi läbi genoomse DNA (GDNA) erinevatel kontsentratsioonidel, mis saadi seerialiselt lahjendatud Staphylococcus Haemolyticus kultuuridest (1 {0^6-10^0 cfu/ml).
Üksuse tõenäosuslik regressioonanalüüs näitas, et Mira-LFS-i testiga määratud 95% LOD oli 0. 147 CFU/reaktsioon.
Spetsiifilisuse kontrollimine
Analüüsides 18 tavalist patogeenset mikroobitüve ja 15 kliinilist stafülokokki haemolyticus tüvesid, määrati Staphylococcus haemolyticus Mira-LFS-i tuvastamise selektiivsus. Tulemused näitasid, et Mira-LFS-i test oli negatiivne 18 muu patogeense bakter ja positiivne 15 Staphylococcus Haemolyticuse kontrollitud kliinilise proovi korral.
Mira-LFS-i tuvastamine on väga selektiivne ja sobib Staphylococcus hemolyticus skriinimiseks.
Tegelik proovi testimine
Lianyungangi teise inimeste haigla kogus juhuslikult 95 isendit, sealhulgas 35 naha- ja pehmete kudede proovi, 16 uriiniproovi, 14 rögaproovi ja 30 vereproovi.
Tulemused näitasid, et tuvastusmeetod oli 100% kooskõlas QPCR -meetodiga. Lisaks oli võrreldes kuldstandardiga (GB/T4789. 11-2003), MIRA-LFS-i tuvastusmeetodi tundlikkus ja spetsiifilisus stafülokokkide hemolyticus infektsiooni tuvastamiseks vastavalt 100% ja 98,73%. Need tulemused kontrollisid selle meetodi tehnilist teostatavust Staphylococcus hemolyticuse tuvastamisel kliinilistes proovides.
MIRA-LFS-meetodit kasutatakse Staphylococcus hemolyticus kiireks tuvastamiseks. See on tõhus, täpne, lihtne ja odavam ning aitab teha kiireid diagnoosimis- ja raviotsuseid.
Tutvuge Mira tehnoloogia kohta
Amp-future multi-ensüümi isotermiline kiire nukleiinhappe amplifikatsioonitehnoloogia võimendab nukleiinhappe konstantsel temperatuuril 39 kraadi -42 kraadi, reaktsiooniaeg on ainult 5-20 minutit. Lisaks ei nõuta rangeid laboratoorseid tingimusi ja taotlusstsenaariumid on mitmekesised: üldhaigla laboriosakonnad, esmatasandi arstiabi, kodukatsed, põllud jne.
Reagentide tootevormid on mitmekesised: külmkuivatatud pulber, külmkuivatatud mikrosfäärid jne; Kuvaritulemused on mitmekesised: geelilektroforees, fluorestsentskõver, kolloidsed kulla testribad jne. Reajal on stabiilne jõudlus, seda on lihtne kasutada ning see on mugav ladustamiseks ja transportimiseks.
Kuna MIRA on tuumikplatvormi tehnoloogia, on ta välja töötanud rea tugitoodete seeria, näiteks "ultrafailne nukleiinhappe vabastamise tehnoloogia", "kahe kanaliga isotermilise fluorestsentsi detektor", "integreeritud täisautomaatse suletud tuvastamise süsteem", "isetestib nukleiinhappe tuvastamise seade" jne. Looge kiire molekulaarse tuvastamise lahendus.