Siin luuakse sCRAM (suboptimaalne protospaceri külgnev motiiv (PAM){0}}vahendatud CRISPR RNA ja Cas12a nukleaas kombineerituna mitme ensüümi isotermilise kiire amplifikatsiooniga), kiire ja ekstraheerimise{2}}vaba diagnostikaplatvorm, mis tuvastab ASFV 20 minuti jooksul. sCRAM integreerib kiire nukleiinhappe vabastamise etapi (40 kraadi, 5 minutit) ühe toru reaktsiooniga, mis ühendab multiensüümi isotermilise amplifikatsiooni (MIRA) ja suboptimaalse PAM{8}}vahendatud CRISPR/
Cas12a süsteem (37 kraadi, 15 min), mis võimaldab instrumentaal-tasuta visuaalset näitu UV-valguse või külgvooluribade (LFS) kaudu. sCRAM demonstreerib ühe-koopia tuvastamise tundlikkust ja puudub rist-reaktiivsus viie tavalise sigade patogeeniga (PRRSV, PCV, PPV, PREV, JEVV). 111 simuleeritud ja kliinilise proovi (sealhulgas veri, plasma ja tampooniproovid) hindamine näitas 100% vastavust qPCR-iga UV-näidu ja 98,20% LFS-i puhul.
näit, kusjuures mõlemad meetodid on 100% spetsiifilised. sCRAM-i lihtsus, kiirus ja kohandatavus valdkonnas rõhutavad selle potentsiaali detsentraliseeritud ASFV-seireks piiratud ressursside{2}}seadetes, pakkudes võimsat tööriista haiguspuhangu ohjeldamiseks.
Selles uuringus töötasime välja sCRAM-i, kiire ja kohapeal{0}}juurutatava ASFV tuvastamise platvormi, mis integreerib suboptimaalse PAM-vahendatud CRISPR/Cas12a koos mitme ensüümi isotermilise amplifikatsiooniga. Analüüs saavutab ühe-koopia 1 koopia/uL tundlikkuse 20 minuti jooksul ja ei näita ristreaktsiooni peamiste sigade patogeenidega. Vere-, plasma- ja tampooniproovide kliiniline valideerimine näitas täielikku vastavust qPCR-ga, kasutades UV-valguse näitu ja 98,20% täpsust külgvooluribade kaudu. Lihtsustatud toimimise, kõrge tundlikkuse ja spetsiifilisuse ning visuaalse tulemuste tõlgendamisega pakub sCRAM suurt potentsiaali kohapealseks ASFV jälgimiseks ja laiemalt{12}}hooldusdiagnostika rakendusteks.
